En tiedä tarvitseeko usein ostaa kulutustarvikkeita. Jos ostat usein laboratoriotarvikkeita, saatat huomata, että useat valmistajat saattavat merkitä tuotteitaan entsyymivapaiksi, pyrogeenivapaiksi ja endotoksiinivapaiksi, erityisesti solubiologiaan ja analyyttiseen biologiaan liittyvissä tarvikkeissa, kuten tavalliset 15 ml ja 50 ml sentrifugiputket, soluviljelypullot, soluviljelyastiat, soluviljelylevyt, kylmäsäilytysputket PCR-levy ja muut tuotteet. Näillä kuvauksilla varustetut tuotteet voivat myös olla kalliimpia kuin tavalliset vastaavat tuotteet. Joten mitä nämä lausunnot tarkoittavat ja miten ne vaikuttavat kokeihimme? Miten meidän tulisi tehdä valintoja ostoksia tehdessämme? Tässä lyhyt esittely.
Määritelmä
1. Pyrogeeni
Pyrogeeni viittaa pyrogeeniseen aineeseen, joka voi aiheuttaa epänormaalia kehon lämpötilan nousua sen jälkeen, kun se on injektoitu kehoon. Laajassa merkityksessä pyrogeeni sisältää bakteeripyrogeenin, endogeenisen makromolekyylipyrogeenin, endogeenisen pienimolekyylisen pyrogeenin ja kemiallisen pyrogeenin. "Pyrogeenillä" tarkoitetaan tässä pääasiassa bakteeripyrogeeniä, joka on joidenkin mikro-organismien, bakteeriruumiiden ja endotoksiinin metaboliitti.
2. Entsyymi
Entsyymit opittiin yläasteella. Biologisena katalyyttinä entsyymit voivat tehokkaasti katalysoida erilaisia biokemiallisia reaktioita organismeissamme. Kuitenkin, kun useimmissa tuotteissa sanotaan, ettei entsyymiä, itse asiassa tarkemmin, ne eivät tarkoita kaikkia entsyymejä, vaan nukleaaseja. Monet valmistajat kirjoittavat myös DNase-vapaa ja RNase-vapaa. Nukleaasi voi hajottaa nukleiinihappomolekyylejä. Se voi spesifisesti hajottaa DNA:ta tai RNA:ta, ja se voi myös vaikuttaa sekä DNA- että RNA-molekyyleihin alhaisella spesifisyydellä.
3. Endotoksiini
Endotoksiini on yleinen termi gram-negatiivisissa bakteereissa esiintyville myrkyllisille aineille. Se on useiden gramnegatiivisten bakteerien soluseinäkomponentti. Se on toksiini, joka vapautuu solun murtumisen jälkeen, ja komponentti on lipopolysakkaridi. Yleisesti uskotaan, että endotoksiini on pyrogeeni. Se on yleisesti hyväksytty lääketuotannon aikana: jos ei ole endotoksiinia, ei ole pyrogeeniä. Siksi tuotannon aikana voidaan tehdä vain endotoksiinitesti ilman pyrogeenitestiä.
Vaikutus
Pyrogeeni ja endotoksiini voivat stimuloida kehoa ja aiheuttaa kuumetta. Farmaseuttisilla, kliinisillä ja muilla aloilla ihmisten turvallisuuden vuoksi on yleensä vaatimuksia pyrogeenin ja endotoksiinin määrästä. Kiinan farmakopeassa on annettu erityisiä menetelmiä pyrogeenin ja endotoksiinin havaitsemiseksi. Mitä tulee molekyylilaboratorioihin, nukleaasi voi hajottaa kohdemolekyylifragmentteja, koska se voi hajottaa DNA:ta. Esimerkiksi PCR-kokeissa, jos nukleaasi on kontaminoitunut, CT-arvoa ei ehkä ole, mikä johtaa vääriin positiivisiin tuloksiin. Siksi kulutustarvikkeet, kuten sucker ja PCR, ovat yleensä nukleaasivapaita.
Pyrogeenin ja endotoksiinin havaitseminen
Seuraavassa on lyhyt johdatus farmakopean pyrogeeni- ja endotoksiinitesteihin.
1. Pyrogeenitestaus
Kanin menetelmä pyrogeenin havaitsemiseksi on kuvattu Kiinan farmakopean yleissäännössä 1142. Käytä terveitä ja päteviä kaneja, injektoi tietty määrä testiainetta kaneihin suonensisäisesti ja tarkkaile kanien lämpötilan nousua määritetyn ajan kuluessa. Testivälineen kanssa kosketuksissa olevien testivälineiden on oltava steriilejä ja pyrogeenivapaita. Pyrogeeni poistetaan yleensä kuivalämpösteriloinnilla (250 astetta, yli 30 minuuttia) tai muilla sopivilla menetelmillä. Jos testatun kanin lämpötila nousee tietylle tasolle tietyn ajan kuluessa, katsotaan, että testituotteen pyrogeenitesti ei täytä vaatimuksia.
2. Endotoksiinitesti
Ennen endotoksiinitestiä limulustestiä käytettiin kansainvälisesti. Erityisiä menetelmiä ovat geelimenetelmä ja fotometrinen menetelmä. Limulus-reagenssi voi agglutinoitua bakteerien endotoksiinin kanssa aiheuttaen geelin tai sameuden muutosta, ja endotoksiinipitoisuus voidaan määrittää mittaamalla tämä muutos. Tachypleus amebocyte -lysaatti on eräänlainen reagenssi, joka uutetaan meren niveljalkaisten Tachypleus amebocyte -lysaatista. Siksi Tachypleus amebocyte -lysaattia on pyydetty ja tapettu suuria määriä maailmanlaajuisesti, ja siitä on tullut myös kansallinen toisen luokan suojeltu eläin Kiinassa. Tällä hetkellä FDA on hyväksynyt rekombinantti-C-tekijämenetelmän korvaamaan TAL-reagenssin. Tämä laki on mainittu myös Kiinan farmakopean pääperiaatteissa.
Kuinka valita
Itse asiassa ei ole vaikeaa valita näiden käsitteiden ymmärtämisen jälkeen. Se perustuu pääasiassa omiin tarpeisiisi. Yleensä kulutustarvikkeet ilman entsyymejä ja pyrogeenejä ovat yleisiä, ja tuotteita, joissa ei ole endotoksiinia, on suhteellisen vähän. Jos itse kokeessa ei ole näille suuria vaatimuksia, voidaan käyttää tavallisia kulutusosia. Esimerkiksi soluja tai vastaavia komponentteja sentrifugoitaessa on parempi käyttää sentrifugiputkea ilman entsyymejä ja pyrogeenejä, kun taas tavallisia sentrifugiputkia voidaan itse asiassa käyttää tavalliseen nestesentrifugointiin.
Lisäksi tämä on myös monien käyttäjien ongelma. Joiltakin yrityksiltä ostettaessa sentrifugiputkia he kysyvät, voidaanko sentrifugiputkia käyttää uudelleen. Itse asiassa tästä ongelmasta keskustellaan tilanteen mukaan, koska sentrifugiputket ovat saastuneet jossain määrin kerran käytön jälkeen, eikä edes painehöyrysterilointi voi poistaa pilaantumista kokonaan, joten jos käytät sitä uudelleen, se riippuu käyttäjän omista tarpeista kokeessa.
Loppujen lopuksi kaikki tuotteet ovat kokeilijoita ja kokeiluja varten. Emme voi vaikuttaa kokeihimme tuotteiden takia, mutta meidän on valittava sopivat tuotteet kokeidemme mukaan.
BKMAM pyrogeeniton, ribotsyymitön, endotoksiiniton Sentrifugiputki, 0,5 ml, 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 10 ml, 15 ml, 50 ml valittavissa.
Pyrogeeniton, ribotsyymiton, endotoksiiniton Cryovials-putki, sisäkierre, ulkokierre, 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml valinnaisesti.
Tervetuloa tilaamaan meiltä!